植物茎尖组培实验流程

植物茎尖组培实验流程

⑴外植体选取

选取生长健壮、已发芽、长势较好、无病害的生姜根状茎作为外植体。

⑵材料预处理

取带芽的枝条或鳞茎球茎，洗衣粉适量冲洗，然后扳取或用清洁剪刀剪取带芽部位，顶芽和腋芽、大芽和小芽分开。继续用洗衣粉清洗10分钟，清洗时需不停晃动。再用自来水冲洗干净，置空培养瓶备用。

2、超净工作台无菌操作准备

检查超净工作台，是否已开机灭菌，酒精灯、酒精瓶、升汞是否齐备、无菌水、培养瓶放置与位置、接种器械是否齐备与放置。

3、外植体消毒

⑴蒸馏水冲洗

外植体置于已杀菌开机的超净工作台上，新洁尔灭洗液消毒双手，无菌蒸馏水清洗外植体2-3次，需随时晃动。

⑵酒精消毒

75%酒精倒入装外植体的容器内，消毒外植体5-60s，时间长短视植物材料情况而定，一般幼嫩材料和室内带菌培养材料消毒时间短，老材料或室外材料消毒时间长。动作一定迅速，需晃动，然后将酒精倒去。整个时间计算以酒精倾倒开始至酒精倒出瓶外为止，

⑶升汞消毒

1%生汞倒入装外植体的容器内，消毒外植体5-10min，时间长短视情况而定。需晃动，在最后3min静置，升汞注满容器，将已灼烧的镊子放入容器升汞内浸泡。

10%次氯酸钠溶液倒入装外植体的容器内，消毒外植体10-12min，时间长短视情况而定。

⑷蒸馏水清洗

用镊子将外植体取出，放入另一无菌蒸馏水瓶中清洗，反复清洗4次。

4、材料的整理

用灼烧冷却的镊子和剪刀对外植体进行处理，剥离外植体材料芽外部小叶片，露出尖端生长点和2-3片叶原基部分，将此部分剪下做培养材料。再用无菌蒸馏水清洗3-4次。

5、接入培养基

培养基瓶放入工作台内，将剥离的材料分别用消毒过的镊子放入培养瓶内，盖上瓶盖，置培养篮内，写上培养时间、操作人及培养品名，入培养室培养。