植物组培技术之茎尖培养方法

植物组培技术之茎尖培养方法

茎尖培养是把茎尖的分生组织或包括有此分生组织的茎尖分离进行无菌培养的方法。在植物组织的培养中，曾是很早以来就被应用的一种方法，茎尖培养除研究枝条的发育和花的形态形成外，也应用于无病毒植物的培养和兰花等园艺作物的营养繁殖等方面，目前此方式是生产无毒苗最基本的方法，下面简单介绍。

   1、外植体的选取及预处理

   ⑴外植体选取

   选取生长健壮、已发芽、长势较好、无病害的生姜根状茎作为外植体。

   ⑵材料预处理

   取带芽的枝条或鳞茎球茎，洗衣粉适量冲洗，然后扳取或用清洁剪刀剪取带芽部位，顶芽和腋芽、大芽和小芽分开。继续用洗衣粉清洗10分钟，清洗时需不停晃动。再用自来水冲洗干净，置空培养瓶备用。

   2、超净工作台无菌操作准备

   检查超净工作台，是否已开机灭菌，酒精灯、酒精瓶、升汞是否齐备、无菌水、培养瓶放置与位置、接种器械是否齐备与放置。

   3、外植体消毒

   ⑴蒸馏水冲洗

   外植体置于已杀菌开机的超净工作台上，新洁尔灭洗液消毒双手，无菌蒸馏水清洗外植体2-3次，需随时晃动。

   ⑵酒精消毒

   75%酒精倒入装外植体的容器内，消毒外植体5-60s，时间长短视植物材料情况而定，一般幼嫩材料和室内带菌培养材料消毒时间短，老材料或室外材料消毒时间长。动作一定迅速，需晃动，然后将酒精倒去。整个时间计算以酒精倾倒开始至酒精倒出瓶外为止，

   ⑶升汞消毒

   1%生汞倒入装外植体的容器内，消毒外植体5-10min，时间长短视情况而定。需晃动，在最后3min静置，升汞注满容器，将已灼烧的镊子放入容器升汞内浸泡。

   10%次氯酸钠溶液倒入装外植体的容器内，消毒外植体10-12min，时间长短视情况而定。

   ⑷蒸馏水清洗

   用镊子将外植体取出，放入另一无菌蒸馏水瓶中清洗，反复清洗4次。

   4、材料的整理

   用灼烧冷却的镊子和剪刀对外植体进行处理，剥离外植体材料芽外部小叶片，露出尖端生长点和2-3片叶原基部分，将此部分剪下做培养材料。再用无菌蒸馏水清洗3-4次。

   5、接入培养基

   培养基瓶放入工作台内，将剥离的材料分别用消毒过的镊子放入培养瓶内，盖上瓶盖，置培养篮内，写上培养时间、操作人及培养品名，入培养室培养。【梅花的秋后养护】