日本小叶常春藤组培方法

日本小叶常春藤组培方法

日本小叶常春藤为常春藤属中耐寒性较强的品种，植株生长健壮，茎叶浓绿，节间短粗，组织充实，露地越冬性能良好，在笔者所在的扬州地区已经受了－10℃至－15℃的低温考验。霜后茎叶略披红晕，为不可多得的冬绿型垂直绿化材料，具有很好的推广应用前景。采用茎节、叶片为外植体，进行组织培养无性系快繁，可有效解决生产应用过程中种源稀少、养殖速率低的矛盾。

    材料与方法

 采用多年生日本小叶常春藤一年生茎枝的茎节和叶片为外植体。茎节外植体初代培养，材料截成厚0．5厘米的小段，叶片外植体切为0.4×0.5厘米的方块。培养温度25℃，光照强度2000lx，光照时间每天12小时。

 技术及应用

 茎节外植体带菌度较高，但组织发育充实，故以中等强度灭菌剂处理为好，即70％酒精0.5分钟＋0.1％升汞10分钟，污染率为29.2％。若将0.1％升汞处理时间增加至15分钟，虽污染率下降至12.5％，但杀伤率将上升，总体存活率反而会下降，故不宜采用。茎尖外植体因其组织幼嫩，试验中虽使用最低强度5％的次氯酸钠处理15分钟，褐变死亡率仍高达72.9％；再降低灭菌强度，虽死亡率可以下降，但污染率又上升，在实际操作中较难掌握，故外植体的选用以茎节为宜。

 初代培养效应与取材时期密切相关。4月初正值露地栽培植株萌芽期，接种后外植体萌发率最高，达82.4％；5月上旬取用的为当年萌生新梢，材料带菌度低，故接种后污染率最低，为20.1％；7月底进入高温多湿的梅雨季节，外植体带菌度急剧上升，灭菌困难，材料污染率上升，高达89.4％。故日本小叶常春藤的茎节组织培养，外植体取用时间以4月初到5月上旬为宜。

 组织培养中，生长素和细胞激动素的添加，均以低浓度为宜。初代培养基以6－ba1.0毫克／升－1＋2.4－d0.1毫克／升－1为好，诱芽率可达90.5％，显著高于其他处理。诱芽生长量达1.2厘米，呈极显著变异水平。继代增殖培养，在6－ba1毫克／升－1水平，生长素配比量仍以低水平为宜，生长素类别以naa优于2.4－d，试验范围内以ms＋6－ba1.0毫克／升－1＋naa0.01毫克／升－1的增殖系数为高。

 叶片愈伤组织诱导培养，接种3天叶片卷曲增厚。这不仅和6－ba／naa相对比值有关（1∶3＞1∶2＞1∶1），且和其绝对用量水平紧密相关，综合试验结果以ms＋6－ba1.0毫克／升－1＋naa3.0毫克／升－1时最高，达82.4％。

 茎节培养过程中，经多次继代养殖，发现有皱叶性状变异的个体出现。同样的性状变异，在其他常春藤物种中有选育成新品种的应用范例，若能将变异性状加以分离、固定，并扩大养殖，在提高其观赏特性上具良好的应用前景，不失为一条途径。若能将组织培养技术和辐照诱变等育种手段相结合，则对常春藤育种研究有很大帮助。