抑菌剂在开放组培中的使用及效果研究一

  1、材料与方法
  1.1供试材料
    1.1.1供试药剂50%多菌灵可湿性粉剂、70%代森猛锌可湿性粉剂、Yl一1、57.6%冠菌清干粒剂、50%扑海因悬浮剂、75%百菌清可湿性粉剂。
    1.1.2供试菌种微球菌（Micrococcus）、葡萄球菌（Staphylococcus）、棕曲霉、黑曲霉、黑青霉、杜氏青霉都是从被污染的培养植物上分离纯化获得。

    1.1.3培养基YEB培养基；PDA培养基。
    1.2试验方法
    1.2.1污染细菌鉴定革兰氏染色法初步鉴定细菌。
    1.2.2抑菌强度测定无菌水稀释药剂成1000mg/L。细菌取0.2mL对数期菌悬液（真菌取0.2mL孢子菌悬液（106个／mL)）与20mLYEB（真菌PDA）培养基混匀倒平板．凝固后每一平板置2个牛津杯（直径8mm)，一杯加O.2mL药剂，另一杯以无菌水作对照，置于28℃温箱培养，葡萄球菌培养24h、微球菌和真菌培养48h后，取出测抑菌圈直径。
    1.2.3细菌最低抑菌浓度测定用无菌水稀释药剂成2000mg/L原液，然后按1:2,1:4,l:8．二稀释至15.625mg/L，余下均同1.2.2.
    1.2.4菌丝生长抑制实验用无菌水配制成106个／mL孢子悬浮液，分别取0.2mL孢子悬浮液与20mLPDA培养基混匀倒平板，28℃温箱遮光培养48h后备用．用无菌水稀释药剂成2000mg/L原液，然后配制成1000,500,250……0.9765625mg/L的含药培养基，对照为不加药的培养基。用打孔器（直径7mm）从备用平板中打取菌饼，菌丝面朝下接种于含药培养基*，每平板加一个菌饼，3次重复，28℃温箱遮光培养，每2d取出测量菌落直径。
    生长抑制率（%）={（对照菌落直径一菌饼直径）一（处理菌落直径一菌饼直径）/（对照菌落直径一菌饼直径）}*100%
    1.2.5袍子萌发抑制试验将孢子接种于液体PDA中，于28℃、130rad/min摇床上培养24h，双层纱布过滤后用无菌水调制成104个／mL备用。用无菌水稀释药剂成2000mg/L的原液，然后配制成1000、250、62.5……0.9765625mg/L的含药培养基．分别取2mL孢子悬浮液与不同浓度的含药培养基混匀，3次重复，28℃培养，72h后镜检计算孢子萌发抑制率.
    孢子萌发抑制率（%）={（对照萌发率一处理萌发率）／对照萌发率｝x100%
    1.2.6对植物生长抑制试验与开放组培初探用无菌水配制药剂成2000mg/L原液，4000rad/min离心10min，上清液用孔径20nm的滤膜过滤备用。将滤好的原液与培养基混合配制成1000、250、62.5mg/L的含药培养基。取健壮的马铃薯试管苗剪成小段，接种于上述含药培养基，对照为不加药的培养基，每梯度6瓶，每瓶10株，其中3瓶正常放置，3od后观察马铃薯生长情况，另外3瓶开口放置，20d后观察马铃薯的污染情况。