野菊嫩茎的组织培养二

  试验方法
    2.1野菊嫩茎的选择
    试验材料在2007年10月29日上午10:00采取。选生长健壮无病虫害的野菊植株，从新分生的枝条上剪取幼嫩带尖茎部15cm左右，作为外植体使用。
    2.2野菊嫩茎的处理
    将剪取的嫩茎带回实验室，将茎上的叶片连带叶柄一同剪掉，但叶柄基部留下5mm以保护侧芽，避免侧芽在灭菌过程中受损。将去掉叶柄的嫩茎剪成长约2cm左右的小段。放在脸盆中用流水冲洗约5min，再用稀释的洗洁精漂洗约10min，最后用流水洗净，放入灭过菌的三角瓶中以待灭菌。灭菌时，将75%的酒精倒人盛有嫩茎小段的三角瓶，接着倒出进行表面灭菌，而后用0.1%的升汞溶液灭菌3min，最后用无菌水冲洗3一4次，在超净工作台上将其接种于培养基上。

    2.3培养基的选择
    由于野菊花同观赏菊花同科同属，据资料介绍，用于菊花培养的培养基有：MS、White、N6、B5等，一般采用MS为基本培养基，添加各种激素进行培养图。诱导培养基为：MS十BA1mg/L+NAA0.lmg/L,pH为5.8左右，培养的温度范围是24一26℃，光照强度是1500一3000lx，每天照光约12h。继代培养基为MS或MS+BA0.2mg/L十NAA0.5mg/L的培养基上。生根培养基为1/2MS十NAA0.1mg/L。另外，各培养基中均加琼脂粉5.5g/L，蔗糖30g/L.
    2.4组培苗练苗
    将瓶苗移出培养室，放在准备室内，打开瓶口封口，将瓶苗室温放置2一3d后，进行移栽。将实验田翻耕，使耕作层土层疏松，整理出畦。在土壤上面铺一层约5cm的蛙石，浇透水。将小拱棚支架搭好备用。将双斜面小棚打成屋脊状或三角形，拱棚南北走向，中间设一条拉杆，可起到坚固抗风的作用阁。一般棚内相对湿度可达70%~100%，白天通风时，棚内相对湿度可保持在40%一60%；夜间密闭时可达到90%以上。棚内地温比露地高5一6℃，有利于再生苗的生长和提高再生苗成活率。当瓶苗根长至2cm左右时，用镊子轻轻取出，用流水将瓶苗根部的培养基冲洗干净，然后栽在准备好的蛙石中，随后用喷壶浇一遍透水，将棚膜罩上，以水压边。白天气温过30℃时用遮阳网遮荫。驯化过程中通过通风、遮荫、洒水使棚内温度白天保持在25℃左右。待白天气温稳定在28℃以上，生了新根约3cm时，可去膜移栽。
  3、结果与分析
    3.1野菊嫩茎侧芽的诱导及生长状况
    接种后第2天，野菊嫩茎外观呈嫩绿色，水渍状，与灭菌前无异。未发现染菌。第3天野菊嫩茎体表有针尖般小黑点，极少部分腋芽已开始萌动，部分叶柄有于枯现象，未发现染菌。第4天大部分野菊嫩茎体表水渍状消失，留有顶芽和侧芽的饱满嫩茎上的芽开始生长。部分叶柄短的嫩茎上部有褐色水渍状现象，这部分芽未萌发。第5天野菊嫩茎体表水渍状消失，叶柄大部分干枯，侧芽萌发在90％以上，大小如小米粒的一半，茎尖幼叶有展开迹象。第6天野菊嫩茎茎尖幼叶已展开，侧芽大部分萌发。第8天后多数芽已展开，茎段上黑点明显。第9天幼芽生长良好，但展开的叶片边缘有焦枯现象。第10天后部分茎尖呈水渍状，生长好的，叶片已完全展开，翠绿，叶面干燥。大部分芽生长良好，部分抽出了嫩枝（注：黑点为灭菌过程中升汞对其体表的损害；继代转接一次，培养基为MS+BA0.2mg/L+NAA0.5mg/L）。
    3.2野菊嫩茎的继代增殖培养
    当茎尖及腋芽萌发生长，长到距离瓶口约1cm，即高约6~7cm时可进行增殖培养。嫩茎生长一段时间后，下部可分化出大如黄豆的棕褐色组织，但芽少有分化。将嫩茎上诱导萌发的腋芽切成数段，每段带1芽1叶，进行短枝接种增殖培养。将其基部插人MS或MS+BA0.2mg／L十NAA0.5mg/L的培养基上，约4周后腋芽长成小植株。
  3.3瓶苗的诱导生根
    野菊继代长成的小植株部分被转人生根培养基1/2MS+NAA0.lmg/L，部分继续增殖培养MS十BA0.2mg/L+NAA0.5mg/L。5d后，有少部分瓶苗其根长至2mm，部分还处于根原基状态，只有小突起，大部分还是未萌动的。株高有所增加但不太明显。叶色黄绿，有些小叶已经干枯，但整体长势较好；8d后，绝大部分已生根约2mm，其叶色开始转绿，整体长势较好；9d后，有少部分瓶苗根的长度已长至lcm，大部分在0.5~0.7cm左右，株高无大的变化，但其粗度明显增加，叶色由黄绿转为绿色，长势较好。
    3.4组培苗练苗
    练苗的野菊再生苗长势很好，仅在1周左右即长出新根。2周后其叶色浓绿，茎秆呈紫褐色或嫩绿色，粗壮。这时可进行移栽。
    4、结语
    该研究发现以野菊的嫩茎作为外植体进行组织培养，培养基要求不苛刻，诱导、继代培养及生根培养均可成功操作。并且瓶苗的练苗也非常成功，说明野菊再生根的能力很好。通过试验了解到，野菊的嫩茎可进行组织培养，而且见效快，为野菊的快速养殖开辟了广阔的前景。