芦根多糖提取新方法的探讨

【关键词】 芦根多糖；蛋壳粉柱；分离纯化

芦根多糖由禾本科植物芦苇的根基提取得到，研究表明芦根多糖具有消炎、利尿、保护肝脏、抗肝纤维化、治疗急慢性肝炎等作用^[1]。分离芦根多糖通常采用凝胶色谱等方法，该方法不仅材料价高，而且操作烦琐、稳定性较差^[2]。本文采用蛋壳粉柱新的分离方法，对拓展提取方法的空间，是十分有利的探索。

1 实验材料和仪器

1．1 蛋壳粉制备 取鸡蛋壳少洗净，除去内膜凉干，稍加粉碎，分别用15%盐酸、5%氢氧化钠浸泡24 h，滤出蛋壳，用水和蒸馏水洗净，用蒸馏水泡24 h，充分干燥，用干式冲击式混合粉碎机粉碎，粒度为0．8 μm的壳粉（备用）。

1．2 芦根 合肥地区产，干式冲击式混合粉碎机，施光仪、红外光谱仪。

1．3 实验操作 将粉碎的新鲜芦根，于冰箱冷冻放置24 h，取300 g立刻投至装有70℃无水乙醇的圆底烧瓶中，回流提取2 h，倾出提取液，用8倍的蒸馏水于80℃提取3次，1．5 h/次，合并提取液，用施转蒸发仪浓缩至200ml。用80%乙醇沉淀多糖、反复进行3次，最高收集9．4 g粗多糖。将粗多糖溶于水，按体积20%加CHCl₃，再按CHCl 3体积20%加入正丁醇，混合后除去中间层变性蛋白，重复2～3次，最后收集上清液、浓缩、透析、干燥。用′HNMR检查蛋白质是否基本除去。称取多糖94 mg，用0．1 mol NaCl水溶抹成糊状，加至已制备好的蛋壳粉上端，用0．1 mol NaCl液淋洗用硫酸苯酚试液测试至不显紫色为止。共收集约45 ml，以80%乙醇沉淀多糖，收集沉淀物，真空干燥，重187 mg。蛋壳粉柱纯化图谱见图1。

2 结果与讨论

2．1 样品分析

2．1．1 标准曲线制作 准确称取在105℃干燥恒重的葡萄糖标准品50．0 mg，量100 ml容量瓶中，加蒸馏水至刻度，摇匀，准确吸取1．0，1．5，2．0，2．5，3．0 ml，分别置50 ml容量瓶中，用蒸馏水释至刻度，精确吸取各2．0 ml，分别加入50 ml/L，苯酚2 ml，摇匀，迅速加入5 ml浓H-2SO-4，摇匀后于沸水中加热5 min，然后移至冷水冷却20 min，另以蒸馏水2．0 ml按上述过程制作空白对照，于490 nm波长处测吸收度，分别为0．151，0．273，0．381，0．475，0．587，求得回归方程：A=0．0568C-0．0352(Y=0．9980，5例)。

3．1．2 重现性实验 分别吸取葡萄糖对照品溶液2．0 ml共5份于50 ml容量瓶中，同3．1．1 操作，测吸收度为0．381，0．380，0．379，0．382，0．379。RSD为0．343%(5例)。

3．1．3 样品含量测定 精密吸取芦根多糖50．0 mg，置100 ml容量瓶中，加蒸馏水至刻度，摇匀，准确明取1．5，2．5，3．0 ml，分别置50 ml容量瓶中，加蒸馏水至刻度，精密吸取上述溶液各2．0 ml，按标准曲线项操作，测得吸收度为0．207，0．361，0．443。据回归方程求得含量分别为765．0，759．2，754．7 mg/g。平均含量为756．9 mg/g。

3．2 芦根多糖旋光度，红外光谱见图2。

3．3 效果分析 蛋壳粉从状态看类似无机物的吸附剂，但实际是有机物与无机物的结合体，即高分子聚合物。因此，作为吸附剂有自身的优点：①稳定性好，易保存，再生处理后可较长期使用，不同于凝胶类，放置会变质，影响使用；②蛋壳粉对多糖类的吸附，可能类同蛋白质与糖的结合，分子间的键合力较弱，因此洗脱比较方便；③蛋壳粉制作方便，价值极为廉价，具有良好前景；④由柱层析图谱说明，是单峰为纯品，但图形不对称提示芦根多糖为杂多糖。

参考文献

1 侯毅．香菇多糖对巨噬细胞一氧化氮和细胞内还原型谷胱甘肽的影响．中草药，2002，33（2）：244-245．

2 阮期平．黄附子中性多糖和碱性蛋白多糖的分离、纯化．中国生化药物杂志，2000，21（1）：20-21．