2、超净工作台无菌操作准备

  检查超净工作台，是否已开机灭菌，酒精灯、酒精瓶、升汞是否齐备、无菌水、培养瓶放置与位置、接种器械是否齐备与放置。

  3、外植体消毒

  ⑴蒸馏水冲洗

  外植体置于已杀菌开机的超净工作台上，新洁尔灭洗液消毒双手，无菌蒸馏水清洗外植体2-3次，需随时晃动。

  ⑵酒精消毒

  75%酒精倒入装外植体的容器内，消毒外植体5-60s，时间长短视植物材料情况而定，一般幼嫩材料和室内带菌培养材料消毒时间短，老材料或室外材料消毒时间长。动作一定迅速，需晃动，然后将酒精倒去。整个时间计算以酒精倾倒开始至酒精倒出瓶外为止，

  ⑶升汞消毒

  1%生汞倒入装外植体的容器内，消毒外植体5-10min，时间长短视情况而定。需晃动，在最后3min静置，升汞注满容器，将已灼烧的镊子放入容器升汞内浸泡。

  10%次氯酸钠溶液倒入装外植体的容器内，消毒外植体10-12min，时间长短视情况而定。

  ⑷蒸馏水清洗

  用镊子将外植体取出，放入另一无菌蒸馏水瓶中清洗，反复清洗4次。