2022-12-26
蝴蝶兰试管苗高效生产技术
一、技术流程母株选择→初代诱导→丛芽分化→继代增殖→壮苗生根→锻炼幼苗→出瓶移栽。
二、启动诱导(一)母株选择。由于数以万计的组培苗均来源于同一外植体,故母株的选择应特别谨慎,要遵循三项基本原则:1.整个群体表现出该品种的典型性状。2.群体生长发育良好,没有普遍发生特定病害浸染,如东亚兰花叶病毒、齿舌兰轮斑病毒。这两种病毒复合感染的现象十分普遍,母株要先进行病毒检测。3.在符合上述条件的群体中选择性状优异的健壮单株作母株。(二)初代诱导。选用已开花花梗的下端休眠芽作为材料,将剪去上端花序的花梗剪成5~7厘米的茎段,用自来水冲洗1~2小时,然后在超净工作台上用75%的酒精浸泡1分钟,无菌水冲洗后放入0.1%的升汞溶液中浸泡10分钟左右,再用无菌水冲洗3~4次,在无菌接种盘上剥去休眠芽的苞片,再放入0.05%的升汞溶液中浸泡4~5分钟,用无菌水再冲洗3~4次。处理后的花梗切成3~4厘米的茎段,每段带一个侧芽,基部向下插入诱导培养基,然后将其置于培养室中培养,光照强度2000勒克斯,光照时间每天12小时,培养温度25℃。侧芽10天后开始萌动,诱导率可达90%。30天后,侧芽可长成幼苗。在花梗休眠芽的诱导过程中,有个别休眠芽萌发后长成类似花梗侧枝的细嫩梗茎,待其长到3厘米、有2~3个芽时将其切离花梗,并重新切段,每段带一个芽,基部向下重新放入诱导培养基中,可继续诱导萌发幼苗。
三、分化与增殖花梗侧芽诱导出幼苗后,将幼苗切离花梗,接种于分化培养基中。然后将其置于培养室中培养,光照强度2500~3000勒克斯,光照时间每天10小时,培养温度25℃。每45~50天继代一次,继代2~3次,即可分化出丛生芽。将分化的丛生芽小心分离,接种于增殖培养基中,然后将其置于培养室中培养,光照强度3000勒克斯,光照时间每天10小时,培养温度25℃。每50天继代一次,增殖倍数在3倍以上。随着继代次数的增加,高浓度的6-BA虽然会提高增殖倍数,但也会引起幼苗的变异,在增殖10代以后或变异株开始出现后,只能用较低浓度的6-BA来促进丛生芽的生长,并及时淘汰变异株。丛生芽的增殖生长有一定的群体效应,当丛生芽切割成只有1~2个芽时,丛生芽的增殖大大减少,一个继代周期后大多数几乎没有增殖,只是苗长大一些。当丛生芽切割成有3~5个芽时,丛生芽的增殖则较为正常。切割丛生芽时,只能将丛生芽轻轻分开,不可对丛生芽的四周进行切割,否则会因切割伤口太多而导致培养基很快褐化,不利于丛生芽的生长与分化,甚至会造成丛生芽的死亡。对一些较大的丛生芽(芽高1.5厘米以上,单轴茎直径0.5厘米以上)进行横切可以大大提高增殖倍数。横切后会在丛生芽基部长出新一轮丛生芽,增殖倍数可提高5倍。因蝴蝶兰单轴茎较短小,在切割时对切割部位的掌握要准确,否则会将芽切死或因没有切去顶芽而达不到应有的增殖倍数。
四、生根与炼苗当芽长至1.5厘米高、有2~3片叶时,转入生根培养基中,然后将其置于培养室中培养,光照强度3000勒克斯,光照时间每天12小时,培养温度25℃~28℃,20天后开始生根。生根后将苗置于光照强度8000~10000勒克斯、光照时间每天12小时的环境下培养20天左右,可以明显提高培养瓶中苗的质量和成活率。当苗高达4厘米、叶片数3~5片时,即可出瓶种植。
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