组培过程中无菌接种过程

组培过程中无菌接种过程

 1、外植体的选取及预处理

 ⑴外植体选取

 选取生长健壮、已发芽、长势较好、无病害的植物带芽的枝条作为外植体。

 ⑵材料预处理

 取带芽的枝条，用洗衣粉适量冲洗，然后扳取或用清洁剪刀剪取带芽部位（约1cm×1cm大小），顶芽和腋芽、大芽和小芽分开。继续用洗衣粉清洗10分钟，清洗时需不停晃动。再用自来水冲洗干净，置空培养瓶备用。

 2、外植体消毒

 ⑴蒸馏水冲洗

 外植体置于已杀菌开机的超净工作台上，新洁尔灭洗液消毒双手，用无菌蒸馏水清洗外植体2-3次，需晃动。

 ⑵酒精消毒

 75%酒精倒入装外植体的容器内，消毒外植体30-60s，时间长短视植物材料情况而定。动作一定迅速，需晃动。然后将酒精倒去。

 ⑶升汞消毒

 1%生汞倒入装外植体的容器内，消毒外植体5-10min，时间长短视情况而定。需晃动，在最后3min静置，升汞注满容器，将已灼烧的镊子放入容器升汞内浸泡。

 ⑷蒸馏水清洗

 用镊子将外植体取出，放入另一无菌蒸馏水瓶中清洗，反复清洗4次。

 ⑸茎尖的剥离

 用灼烧冷却的镊子和剪刀对外植体进行处理，剥离外植体材料芽外部小叶片，露出尖端生长点和2-3片叶原基部分，将此部分剪下做培养材料。再用无菌蒸馏水清洗3-4次。

 ⑹接入培养基

 培养基瓶放入工作台内，将剥离的材料分别用消毒过的镊子放入培养瓶内，盖上瓶盖，置培养篮内，写上培养时间、操作人及培养品名，入培养室培养。