国兰组培技术

北京四中开设植物组织培养选修课已经近20年了。近些年来，他们与*一家园艺公司合作开展中国兰花的组织培养研究，并取得了很好的成绩。同学们从课外学习中也有很大的收获。下面刊登的是由该选修课任课老师陈颖推荐的高一年级姜小舟同学撰写的《中国兰花的组织培养》一文。

 我们在学校开设的植物组织培养选修课上，进行了兰花组培的实验。下面谈谈自己在实验中的一些心得。

 取外植体

 首先是种子。在其他植物的组织培养中，一般而言，最容易的是用种子组培，即把种子接入空白培养基即可。而中国兰花却不同。由于中国兰花的种皮内含有大量空气，不易吸水，种子大多发育不完全，所以很难成功。并且，有一种理论还说中国兰花的种子是要在特定的细菌作用下才能萌发。所以中国兰花的种子很难组培成功，我们多次做的种子萌发试验也没有成功。

 其次是芽。我选取的材料是建兰的芽。我把长得较好的建兰的大叶和根去掉，留下3厘米的叶子以及其内部。先用自来水冲洗干净，再用碘伏兑水泡3分钟，拿出用无菌水冲洗至少5遍，冲干净后放入75％的乙醇中浸泡30秒钟拿出，用无菌水冲洗至少5遍，然后放入1‰的氯化汞中浸泡6分钟至7分钟，（注意：时间太长会导致褐化，而时间太短会导致消毒不彻底，最终引起污染。）在超净工作台中取出，用无菌水冲至少5遍，放在无菌包上，用消过毒的镊子和刀把叶子层层剥去，直到留下0.5厘米，或者更小的芽为止，然后接入培养基。培养基可用ms＋naa1--5适量加苹果和香蕉等。（注意：中国兰花容易褐化，所以接种时尽量不要让它暴露在空气之中。）如不污染两个月左右就可抽出新叶了。

 最后是龙根。龙根的组培过程大致与芽的组培过程相同，但成活的可能性比芽高，不过龙根在市场极为少见。一旦成功其繁殖率极高。

 组培

 中国兰花的组织培养与其他植物大体相同，但由于其容易褐化，所以在组培过程中要注意观察。用组织培养的方法既容易产生变异的兰苗，平时应细心观察，对稍有变异表现的兰苗或龙根要及时移出，进行单独接种，并保护繁殖。坚持下去，便可得到有价值的变异兰苗。如果有褐化的，要及时把褐化部分清除，以免造成整瓶褐化。如果有污染，要进行救治。

 首先，让我们来了解一下什么叫做污染。污染的广义是混入有害的东西，而我们用肉眼能看到的这个“有害的东西”在植物组织培养中指的就是菌，这个“菌”分为两大类--真菌和细菌。真菌就是组培瓶里那些毛状的、颜色暗淡，多为白色、灰绿色或棕褐色的物质（如果表面有水，水会成水珠状并且会流动）。细菌就是组培瓶里那些粘稠状的、颜色鲜艳，多为红色、黄色或带光泽的蓝紫色物质（如果表面有水，水会与细菌混合，在细菌表面停留）。真菌污染的原因多是组培瓶等器械暴露在工作台之外，或在接种完毕封口时操作不当，致使真菌孢子进入瓶内。细菌污染是由于用具等消毒不彻底或接种操作人员在工作中造成消毒后器械的二次污染所致。通过区别真菌污染和细菌污染我们可以找到操作的漏洞，在以后的实践中改进而减少污染。在救治污染组培苗时要特别注意：真菌污染的组培苗在打开瓶口时，动作要轻，瓶口要背对工作台送风的方向，尽量避免孢子被风吹起而造成再污染。而细菌污染的组培苗在救治时要把组培苗沾染异物部位切掉。

 1．取出

 先用镊子夹取出中国兰花，再用剪刀把已污染的部分剪掉（剪完后剪刀和镊子一定要放入酒精中消毒，下次用之前还要用火烤）。注意要尽量不带出培养基（因为瓶中所有的物质全部被污染），并且要把已有明显污染的部分去掉。

 2．洗涤

 先把污染的中国兰花放入75％的酒精中静置或晃动30秒再放入1‰的氯化汞溶液（注意：由于氯化汞有剧毒，所以小心使用）中静置消毒5分钟到9分钟（注意：时间太长对兰花有害，时间太短容易造成消毒不彻底），由于氯化汞难以去除，只有流水冲洗才会去掉，用无菌水至少五次震荡清洗，才能去掉残留氯化汞。