2022-04-14
花卉培养基的成分及常用化学药品
培养基是植物组织培养中离体材料赖以生存和发展的基地,培养基的成分,是根据植物生长和发育所需的营养而设计的,它既有植物所需的氮、磷、钾及锌、铜、钼、铁等元素,同时也包含了对生长发育起促进和调节作用的有机物质及植物激素等。人们通常在含有上述成分的溶液中加入琼脂使其凝固。琼脂需要煮沸才能溶化,这就是人们所谓的“煮”培养基。“煮”好的培养基分装在试管或三角瓶里,冷却后又变为凝固状态,所以也叫固体培养基。如果培养基中不加入琼脂,则不能凝固,灭菌后保持液体状态,叫做液体培养基。在细胞的液体振荡培养、花药及花粉的悬浮培养中用的就是这种培养基。由上述各种物质配制的培养基称为合成培养基。
大多数植物组织培养中所用的培养基成分,是由无机营养物质、碳源、维生素、生长调节物质及有机附加物等五类物质组成。
1.无机营养物:现已知植物的正常生长中至少需要15种重要的无机元素,即碳、氢、氧、氮、磷、硫、钙、钾、镁、铁、锰、铜、锌、硼、铝,其中前9种元素需要的数量较大,称为大量元素或主要元素;后6种元素需要的数量较少,称为微量元素或次要元素。这些元素分别由无机盐提供。如无机氮源可由硝酸盐或铵盐提供,当作为唯一的氮源时,硝酸盐的作用比铵盐好得多,但在单独使用硝酸盐时,培养基的pH值会向碱性方面漂移,若在加入硝酸盐的同时加入少量铵盐,则会阻止这种漂移,因此两者可混合使用。磷、硫分别由磷酸盐和硫酸盐提供,铁以螯合铁的形式提供,即FeS04.7HzO与Naz.EDTA(螯合剂)的混合。
2.碳源:离体培养的植物组织或细胞,它们的光合作用能力较弱,因此需要在培养基中附加一些碳水化合物以供需要。蔗糖是最好的碳素来源,大多数细胞所需蔗糖浓度是2%-5%。在有些组织或器官的培养中,所需蔗糖浓度有高达7%甚至15%的,如玉米的花药培养。蔗糖除作为培养基中的碳源和能源外,对维持培养基的渗透压也有重要作用。另外,葡萄糖和果糖也是较理想的碳源,可使某些组织生长得很好。
3.维生素:为了能使培养物很好地生长,在培养基中必须补加各种维生素,这些维生素属于B簇维生素类,其中硫胺素(VBl)-般认为是一种必需的成分,其它如吡哆醇(VB6)、烟酸(VB3)、泛酸钙(VBs)和肌醇也都能改善培养植物组织的生长状况。常用浓度单位是毫克/升,如VB,、VB6等多为O.l-lO毫克/升,肌醇往往在lO-lOO毫克/升之间。
4.有机附加物:包括人工合成或天然的有机营养物质。最常用的有酪朊水解物、酵母提取物、椰子汁及各种氨基酸等。它们均可按不同量与培养基混合。如鲜椰子汁使用浓度多在10%,果汁(如番茄汁、菠萝汁或香蕉汁)使用浓度为5%-10%。
5.琼脂:主要是作为培养基的支持物,可使培养基凝胶化,然后把组织置于培养基表面,避免使用液体培养基静止培养时组织会沉没并因缺氧而死亡。琼脂是一种由海藻中提取出来的多糖类物质,在90℃左右的水中溶解,在40℃以下便凝固成为透明的凝胶体。使用浓度为7-10克/升。若浓度太高,培养基就会变得很硬,营养物质就难于扩散到培养物的组织中去。培养基的酸碱度也影响琼脂的凝固度。一般来说,当pH值高于6时,培养基将会变硬;低于5时,琼脂就不能很好地凝固。
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