高效液相色谱法测定大豆异黄酮含量的研究

高效液相色谱法测定大豆异黄酮含量的研究

［摘要］大豆异黄酮是一种类植物雌激素，具有强心、降血脂、抗癌和抑制骨质疏松等作用，受到了越来越广泛的应用。本文重点讨论了目前比较先进的高效液相色谱法（HPLC）来测定大豆异黄酮的组份及含量。

［关键词］ 大豆异黄酮 HPLC 色谱图

大豆异黄酮是大豆生长中形成的一类次生代谢产物，它主要存在的化学形式是结合型的糖甙。目前通常采用高效液相色谱法（HPLC）进行其组份的定量测定。

一 定量测定时的计算方法

在进行大豆异黄酮定量测定时，可根据样品的具体情况采用峰面积法或峰高法。但用归一法或内标法测定杂质总量时，须采用峰面积法。

1、面积归一化法:测定供试品中各杂质及杂质的总量限度采用不加校正因子的峰面积归一法。计算各杂质峰面积及其总和，并求出占总峰面积的百分率。但溶剂峰不计算在内。色谱图的记录时间应根据各品种所含杂质的保留时间决定，除另有规定外,可为该品种项下主成分保留时间的倍数。

2、主成分自身对照法:当杂质峰面积与成分峰面积相差悬殊时，采用主成分自身对照法。在测定前，先按各品种项下规定的杂质限度，将供试品稀释成一定浓度的溶液作为对照溶液，进样，调节检测器的灵敏度或进样量，使对照溶液中的主成分色谱峰面积满足准确测量要求。然后取供试品溶液，进样，记录时间，除另有规定外，应为主成分保留时间的倍数。根据测得的供试品溶液的各杂质峰面积及其总和并和对照溶液主成分的峰面积比较，计算杂质限度。

3、内标法测定供试品中杂质的总量限度，采用不加校正因子的峰面积法。取供试品,按各品种项下规定的方法配制不含内标物质的供试品溶液,注入仪器,记录色谱图Ｉ;再配制含有内标物质的供试品溶液，在同样的条件下注样，记录色谱图Ⅱ。记录的时间除另有规定外，应为该品种项下规定的内标峰保留时间的倍数，色谱图上内标峰高应为记录仪满标度的30％以上，否则应调整注样量或检测器灵敏度。 如果色谱图Ⅰ中没有与色谱图Ⅱ上内标峰保留时间相同的杂质峰，则色谱图Ⅱ中各杂质峰面积之和应小于内标物质峰面积。如果色谱图Ⅰ中有与色谱图Ⅱ上内标物质峰保留时间相同的杂质峰，应将色谱图Ⅱ上的内标物质峰面积减去色谱图Ⅰ中此杂质峰面积，即为内标物质峰的校正面积；色谱图Ⅱ中各杂质峰总面积加色谱图Ⅰ中此杂峰面积，即为各杂质峰的校正总面积，各杂质峰的校正总面积应小于内标物质峰的校正面积。

二 具体测定实例

笔者具体进行了851产品中的大豆异黄酮组份的定量测定。

1材料与方法

1.1色谱条件

色谱柱：Hypersil GOLD(4.6 X 150mm X 5um)；流动相：含0.2%的磷酸的甲醇溶液（B溶液），含0.2%的磷酸的水溶液（A溶液）；梯度程序：；流量：1ml/min检测波长：260nm；进样量：10ul。

1.2 样品处理

1.2.1 851口服液：准确称取1g大豆发酵液于10ml离心管中，加入5ml 95%乙醇振匀，在60℃水浴中超声10min，后放入离心机内离心5min，将离心上清液用定性滤纸过滤，滤液至10ml容量瓶。离心沉淀物加入3ml 80%乙醇振匀，在60℃水浴中超声10min，后放入离心机内离心5min，将离心上清液用定性滤纸过滤，滤液同样汇至10ml容量瓶，最后用80%乙醇定容。

1.2.2 851粉：准确称取1g851干燥粉于10ml离心管中，加入6ml 95%乙醇振匀，在60℃水浴中超声10min，后放入离心机内离心10min，将离心上清液用定性滤纸过滤，滤液至10ml容量瓶。离心沉淀物加入3ml 80%乙醇振匀，在60℃水浴中超声10min，后放入离心机内离心10min，将离心上清液用定性滤纸过滤，滤液同样汇至10ml容量瓶，最后用80%乙醇定容。

2结果与分析

2.1 试样测定 采集不同批号851粉及851口服液，依照上述方法测定，结果如表

3 结论

采用高效液相法能够准确的分离出各种大豆异黄酮的组份，从测试结果来分析，我们现有的851产品中的大豆异黄酮主要是以其甙元的型式存在，这更有利于大豆异黄酮发挥抗癌及其他药理作用。

三 结束语

高效液相色谱法是目前测定大豆异黄酮研究工作中应用最为广泛的一种方法，此法具有测定样品范围广、样品制备步骤少、成本低、分离效率高、灵敏度好、测定结果准确等特点，且有多种检测器可供选择。

参考文献

1. 刘新宇，候美琴．HPLC法测定复方感冒制剂的研究．药物分

析，1997；17（5）.

2. 唐传核. 植物功能性食品[M]北京：化学工业出版社.2004;10.