新红星苹果花芽蛋白质提取及双向电泳的改良方法

  摘要：以新红星苹果花芽为材料，探索适合蛋白质的提取方法及其双向电泳的条件。采用物理和化学2种方法充分裂解植物组织细胞，并用低温操作加入PVP等去除植物大量的酚类物质，最后离心去除不溶性杂质的苹果蛋白质组双向电泳(2－DE)样品制备方法，第1向为ISO～DALT等电聚焦，第2向为垂直平板SDS－PAGE。通过对样品制备、双向电泳参数的选择及染色等方面进行优化，电泳图谱可分辨出蛋白质斑点数在519个以上，蛋白质相对分子质量约为14.0～97.0 ku，主要分布为14.0～67.0 ku；等电点约为3.5～9.0，主要分布在4.0～7.0。

  关键词：苹果；蛋白质；双向电泳
  中图分类号：S661．1 文献标识码：A　文章编号：1009-9980(2007)04-549-04
  随着功能基因组学的兴起，蛋白质组学(proteomics)技术已成为生命科学研究的重点，同时给果树花芽分化分子机理研究带来了新的机遇。双向电泳技术是蛋白质组研究的3大关键核心技术之首。其基本原理是：第1向为等电聚焦(18081ectrofocusing，IEF)，根据蛋白等电点不同进行分离；第2向为SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)，是基于蛋白质亚基分子质量不同，将第1向分离后的蛋白质进一步分离。蛋白质经过电荷和质量的2次分离后，可以得到蛋白质等电点和分子量的信息。