无菌播种

  （一）实践目的
    学习利用植物种子的胚轴进行愈伤组织培养的方法，主要是种子的无菌接种技术。

    （二）实践地点和时间
    植物组培室、建议4学时
    （三）实践用具与材料
    超净工作台、手术剪、枪状镊、酒精灯、酒精瓶、纱布、高压灭菌锅、电子天平、盛物篮、植物种子、70%酒精、0.1%升汞、ZT、2,4—D、大量元素、微量元素、琼脂、蔗糖
    （四）实践内容
    1、培养基制备
    配制MS培养基：用大量元素、微量元素、维生素、铁盐配制，不加植物生长物质。
    每升培养基加入30/L蔗糖、8g琼脂，将pH值调节到5.8。
    2、高压灭菌
    培养基入高压锅1.11-1.12Pa下稳压灭菌23分钟，制备无菌水，同样高压灭菌30分钟，灭菌时将接种器械和纱布等放入高压锅一同灭菌。
    3、无菌苗的制备
    选择健康饱满的种子，流水下清洗干净，置超净工作台上。无菌水冲洗2-3次后，视材料情况，（较老较硬的种子）可剥离种皮后0.1%升汞灭菌，也可以（较嫩较软的种子）先灭菌后再用器械无菌剥离种皮。
    4、无菌播种
    剥离种皮的种子用无菌水2-3次冲洗后，接种到已制备的MS培养基中，每瓶培养基接种一粒。做好标记，置于培养室光下培养，以后一周随时观察生长状况。
    5、清洁整理
    清洁整理工作台和组培室，并将器械等工具清洗整理好以备下次实训使用。
    （五）作业
    写出下胚轴愈伤组织培养实践报告，并写明下胚轴愈伤组织培养的操作要领
    （六）评分标准
    无菌播种操作正确，成活率高，污染率小。