蝴蝶兰的组培快繁技术

蝴蝶兰属热带气生兰, 花形似蝴蝶, 因而得名。其花形态美丽, 色彩丰富, 花期长, 在热带兰中有“ 兰花皇后”之美称, 是近年来最受欢迎的洋兰之一。蝴蝶兰是单茎性气生兰, 植株极少发育侧芽, 且种子极难萌发, 对其进行常规性的繁殖, 增殖速度很慢。因此, 多采用组织培养的方法对其进行快速繁殖, 以达到工厂化育苗的目的。

1 .外植体

蝴蝶兰的快速繁殖可选用的外植体有茎尖、茎段、叶片、花梗腋芽、花梗节间、根尖等, 其方法各异, 难度各有高低。

2 .采样、消毒与初代培养

选用的外植体不同, 其采样、消毒与初代培养的方法也不相同。下面分别就各种方法做一介绍:

(1 )花梗腋芽培养

将蝴蝶兰花梗剪下, 用75%酒精棉球擦拭, 切成约5 厘米的每节带芽小段, 仔细除去苞片, 防止伤及嫩芽,然后用2%次氯酸钠溶液消毒20 分钟, 其间不停地摇动。消毒后用无菌水冲洗3～5 次, 放到培养皿中。用4 号解剖刀将两端各切去0 .5 厘米, 芽体朝上插接在1/ 2MS+ 3 毫克/ 升6 苄基腺嘌呤培养基上。培养基中还需加入蔗糖20 克/ 升, 水解乳蛋白1 克/ 升, 琼脂8 克/ 升, 活性炭1 克/ 升, 调pH 值为5 .6。

(2 )茎尖培养

茎尖是组培成功率较高的部位, 但蝴蝶兰的茎尖深藏于叶片夹缝中, 分离和消毒都比较困难。茎尖的取材有两种方法: 一是将除去叶片的茎用水冲洗, 再用10% 的漂白粉溶液作表面灭菌15 分钟( 每100 毫升消毒液加1 滴吐温20 ) , 除去叶原基后, 再用5% 漂白粉液灭菌10 分钟, 然后用无菌水冲洗。

切取茎尖和各叶基部的腋芽, 大小约2～3 毫米, 接种到培养基上,用添加15%椰乳的V&W 培养基进行液体培养,或加9 克/ 升琼脂进行固体培养。培养温度为25 ℃ , 光强2 000勒克司, 每天光照时间为16～24 小时。液体培养以160 转/ 分钟速度做震荡培养, 7～10 天再转至新培养基。从开始培养算起, 1个月后转到固体培养基。在这种条件下培养1 个月即可形成原球茎状球体, 以后可继代增殖。二是先诱导花梗侧芽成为植株, 再利用试管苗的茎尖进行培养。其方法是: 在双目镜下剥取约0 .3 毫米大小的茎尖, 接种到MS(附录表1 1) + 3 毫克/ 升6 苄基腺嘌呤固体培养基上, 在温度( 25±2 ) ℃ , 光强1 500 勒, 每天光照10小时条件下培养。14 天可见茎尖膨大, 呈浅绿色半球状, 3 个月后, 长成桑果状原球茎状体, 组织块6 毫米。此方法最大的优点是免去了外植体消毒的程序, 成功的可能性较大。

(3 )花梗节间的培养

正在伸长的蝴蝶兰幼嫩花茎具有分化原球茎的能力, 因此可采用快速伸长的花梗节间作培养材料。从花梗可见至其后的45 天之间, 全部幼嫩花序以及花梗等具有细胞分裂能力的节间组织, 最有利于诱发原球茎形成, 成功率可达62 .9%～77 .1%。从第一花蕾可见起, 随花梗的发育分化, 原球茎的比率下降, 能作为外植体的节间也愈短。具体操作方法为: 切取花梗节间, 进行表面消毒, 然后斜切成1～1 .5 毫米厚的薄片, 平放在固体斜面培养基上。培养基配方为: 1 .2 倍的V&W无机盐, 加100 毫克/ 升肌醇, 维生素B1 、B6 和烟酸各0 .5毫克/ 升, 1 毫克/ 升6 苄基腺嘌呤, 2% 蔗糖, 0 .8%琼脂。置温度(26±2 ) ℃ , 光强500 勒, 每天光照16 小时的环境下培养。

(4 )叶培养

从3～4 月龄蝴蝶兰植株上取幼叶, 用自来水冲洗干净。在超净工作台上, 叶片用75% 酒精消毒30 秒, 然后用无菌水清洗2～3 遍, 再用0 .1%升汞溶液浸泡11 分钟, 最后用无菌水冲洗4～5 遍。用无菌手术刀将叶片切成5 平方毫米左右大小的小块, 平放或按极性接种在MS+ 3 .0 毫克/ 升6苄基腺嘌呤+ 0 .2 毫克/ 升萘乙酸诱导培养基上( 培养基中加入蔗糖20 克/ 升, 琼脂12 克/ 升, 椰汁200 毫升/ 升) , 近轴面向上。培养条件为: 温度25～28 ℃ , 光强1 600～2 000 勒, 每天光照10～12小时。幼叶切块在诱导培养基上培养1～2 个月后, 从每个叶片组织块上可产生1～7 个不等的原球茎。

(5 )根组织培养

取正在培养的花梗苗, 切取根尖长约1～1 .5厘米, 并用解剖刀切去尖端约1 毫米, 露出根的分生组织, 接种于根尖诱导培养基MS+ 8～12 毫克/ 升6 苄基腺嘌呤+ 0 .5～1 .0 毫克/ 升萘乙酸+ 10% 椰乳, 附加3% 蔗糖, 培养基中加入一块泡沫海绵, pH5 .4～ 5 .6; 液体震荡培养( 30 转/ 分钟) , 培养温度( 27±2 ) ℃ , 光强1 000～2 000 勒, 每天光照10 小时。20 天左右材料膨大且表面颜色明显变深, 60 天后根分生组织部位开始有分化芽, 分化率约为60%。再过45 天左右, 切下分化芽, 转入原球茎诱导培养基2/ 3MS+ 1～3 毫克/ 升6 苄基腺嘌呤+ 0 .5 ～1 .0 毫克/ 升萘乙酸+ 10% 椰乳, 加蔗糖3% , 琼脂0 .7%。经2 个月可形成原球茎。

3 .继代培养

蝴蝶兰早期原球茎状球体外观象瘤状愈伤组织, 继续培养可见表面突起一个个圆球, 部分表面细胞分化出根毛状物。在原球茎球状体形成后, 无菌条件下将原球茎取出切割成几小块, 切块不可太小( 直径> 2 毫米) , 转入MS+2 .0 毫克/ 升6 苄基腺嘌呤+ 0 .5 毫克/ 升萘乙酸( 加蔗糖20克/ 升, 琼脂12 克/ 升, 椰汁200 毫升/ 升)继代培养基中, 进行增殖培养。或在原球体的诱导时, 以1/ 2MS 为基本培养基, 激素以2 毫克/ 升6 苄基腺嘌呤+ 0 .2 毫克/ 升萘乙酸, 配方中均加入糖20 克/ 升, 琼脂8 克/ 升, 调pH 值5 .6 , 也可获得理想的效果。培养60 天左右, 再进行分割转移。通过这种方式, 原球茎可成倍增长。

4 .小植株的培养

将不需继代的原球茎, 在无菌条件下, 切开丛生小植株, 将小植株转入育苗培养基上培养。育苗培养基可选用1/ 2MS+ 1 .5 毫克/ 升吲哚丁酸+ 0 .05 毫克/ 升萘乙酸, 并加入蔗糖20 克/ 升, 琼脂12 克/ 升, 活性炭5 克/ 升, 椰汁200毫升/ 升; 或2/ 3MS+ 香蕉100 克/ 升, 加蔗糖30/ 升,琼脂7 克/ 升。此后, 将其转入1/ 2MS+ 0 .8 毫克/ 升萘乙酸的生根培养基。不久, 小植株生根。当小植株长到一定大小时, 移入温室。切离丛生小植株时, 基部未分化的原球茎及刚分化的小芽应接入诱导培养基中, 作为种苗。一段时间后, 将长大的种苗移出, 种植, 小苗及原球茎可继续增殖与分化。

5 .试管苗出瓶移栽

当小植株长至4 厘米左右, 叶3～4 片,根2～3 条时, 即可移栽。此时将小植株带瓶移入温室内, 1～2 周后, 再将瓶塞半开或完全打开炼苗3～5 天后, 取出组培苗, 用自来水洗净其根部的培养基, 将根部放于50%多菌灵水溶液中消毒2小时, 药液浓度为1 000 倍, 晾干后即可栽植于水苔穴盘中。刚定植的植株, 温度白天以20～25 ℃为宜, 夜间以18～23 ℃为宜。以后, 温室内日温以25～29 ℃为宜, 夜温以20～24 ℃为宜。湿度以80%～90%为好, 以后逐渐保持在70% 左右。初期光照不宜太强, 一般以1 500～2 500 勒为佳。多采用遮阳网, 春秋用一层遮阳网遮光50%左右, 夏季用双层遮阳网, 遮光70%左右, 冬季可适当减少遮荫。缓苗后(两周左右) 逐步提高光照强度至6 000～8 000勒。蝴蝶兰根部忌积水, 水分过多, 易引起根系腐烂。刚出瓶的小苗应勤补水, 中苗或大苗根据干湿程度浇水; 一般情况下, 在盆内基质表面已变干, 盆面水草微发白时再浇水。春季可4～5天浇水1 次, 保持盆内基质潮湿即可。浇水时要让整个基质湿透。浇水时间以上午或清晨为佳。幼苗移栽初期不可施肥, 定植后1 个月,可喷施液肥。