沙棘中黄酮类成分毛细管电泳指纹图谱的方法学研究

沙棘中黄酮类成分毛细管电泳指纹图谱的方法学研究

摘要 建立沙棘中黄酮类成分的毛细管电泳指纹图谱，采用毛细管电泳法，所建立的指纹图谱具有稳定、重现性好等特点，将有助于沙棘的标准化种植、质量控制。

关键词 沙棘；毛细管电泳；指纹图谱

沙棘作为一种药食两用植物，成为近年来国内外研究开发的热点之一，黄酮是沙棘中最主要的活性物质。近十几年来发展迅速的毛细管电泳(CE)是一种高效分离技术，具有高效、快速、进样体积小、溶剂消耗少和抗污染能力强等特点。本研究采用毛细管区带电泳(CZE)分析方法，建立沙棘指纹图谱，为其质量控制提供依据。

1 仪器与试剂

AgilentHP^3D毛细管电泳仪含Agilent化学工作站。甲醇、乙醇、油醚均为分析纯；水为超纯水。沙棘采自辽宁朝阳地区大西沟、猫耳胡同、小平方、孙家窝铺、新店，经鉴定为中国沙棘，共10批次。

2方法与结果

2．1 电泳分析条件

未涂层石英毛细管(65cm×50um，有效长度57cm)；缓冲溶液为89mmoL／L硼酸-50mmoL／LTris-15％(v／v)甲醇(pH值8．5)。运行电压30KV，分离温度25℃，测定波长254nm，压力自动进样50mbar×20s。

2．2 供试品溶液的制备

将沙棘捣碎后，精密称取5g，加乙醇20mL，超声提取30min，过滤，合并滤液，减压浓缩，取上清液经0．45um滤膜过滤后分析。

2．3 方法学考察

稳定性：同一供试品溶液，室温放置，在0h、2h、4h、8h、16h和24h测定芦丁和槲皮素峰面积，KSD

2．4 沙棘黄酮类成分CE指纹图谱分析

2．4．1 特征峰的标定(见图1)。以芦丁的峰面积作为1，计算各共有峰与芦丁峰面积的比值。相对保留时间：1(0．55)，2(0．647)，3(0．688)，4(0．699)，5(0．88)，6(0．912)，7(0．977)，8(1)，9(1．22)。相对峰面积：1(0．149)，2(0．997)，3(0．462)，4(0．64)，5(1．338)，6(0．30)，7(0．42)，8(1)，9(0．20)。

2．4．2 指纹图谱相似度评价。应用指纹图谱相似度计算软件选用相关系数法考察样品间的相似度，结果见表2。据此，我们制定了真伪鉴别相似度值的标准，即相关系数不低于0．8。

3 结论

3．1 样品提取溶剂、时间和方法的选择

考察了甲醇、乙醇、乙酸乙酯等3种试剂的提取效果，结果乙醇的提取效果最好。考察了超声法、加热回流法、索式提取法等3种提取方法，结果表明超声提取法效果最好。考察了甲醇超声提取15min、30min、45min的提取效果，分析比较后发现超声30min为好。

3．2 电泳条件的选择

缓冲溶液条件的优化一般包括pH值、电解质种类和浓度等。采用正交设计法考察了缓冲溶液中Tris、硼酸和甲醇的浓度三个因素对分离的影响，结果表明缓冲溶液组成为50mmoL／LTris-500mmoL／LH3B09-15mmoL／LCH30H(pH值8．5)时，分离效果较好。

沙棘分布广泛，从我们收集的10个样品来看，尽管各样品中黄酮类成分含量差异较大，但相对保留时间一致，这就提示我们在沙棘的品种真伪鉴别中，只通过相对保留时间的对比，就可以做到准确鉴别。

本课题仅仅初步研究了沙棘黄酮类成分的指纹图谱，要满足对沙棘的全面质量管理，需要建立能够反映沙棘内在质量的、全面的色谱指纹谱，尚需进行大量样本分析和性能比较研究。

本文中所涉及到的图表、注解、公式等内容请以PDF格式阅读原文。

原版全文