大花蕙兰组织培养生产技术

一、启动诱导（一）母株的选择。母株的选择应遵循三项基本原则：1.整个群体表现出该品种的典型性状；2.群体生长发育良好，没有普遍发生特定病害浸染，特别是东亚兰花叶病毒，齿舌兰轮斑病毒；3.在符合上述条件的群体中选择性状优异的健壮单株作母株。（二）外植体处理。选择叶片未完全展开的肥壮营养芽（勿选花芽）为外植体，先剥去2～3片外层叶片，再手持兰花叶芽梢，切去基部胜物及损伤、老化组织，最后逐层剥净外层叶片，直至有小顶芽和小侧芽露出。然后在超净工作台上先用70%的酒精浸泡外植体30秒，用无菌水冲洗后，再放入0.1%的氯化汞溶液中浸泡8分钟左右，再用无菌水冲洗3～4次，然后在无菌接种盘上小心切下顶芽和侧芽。（三）圆球茎诱导与驯化。将切下的顶芽和侧芽插入诱导培养基中，基部向下，稍稍露出芽尖。然后将其置于培养室中进行培养，光照强度1000～1500勒克斯，光照时间每天14小时，培养温度25℃左右。10天后芽开始萌动，诱导率在85%以上。在圆球茎的诱导过程中，有80%左右的芽萌发后很容易长成小苗。诱导30天后，待小苗长至4厘米、基部膨大时，将苗切离基部，并将膨大基部纵切成厚3～4毫米的薄片，切口向下重新放入相同的新鲜培养基中，30～35天从下端切口部位可长出类似愈伤组织的圆球茎，其中顶芽诱导率最高，诱导速度也最快，侧芽次之。

 二、继代增殖和幼苗分化将圆球茎接种于继代培养基中，然后将其置于培养室中培养，培养温度25℃左右，光照强度3000勒克斯，光照时间每天10小时。每45～50天继代一次，增殖倍数可在10倍以上。继代增殖初期用浓度为1.5×10-6至2×10-6的6-ba（植物生长调节剂）可以较快地积累材料，随着继代次数的增加，特别是15代以后或变异株开始出现后，只能用浓度为0.5×10-6至1.5×10-6的6-ba（植物生长调节剂），并在生产中及时淘汰变异的圆球茎。变异的圆球茎表面只是光滑一片，没有芽尖，不能分化出芽苗。当圆球茎继代到所需数量时，直接将完整的圆球茎转移到新鲜的增殖培养基中，不要纵切分割，也不要切除芽尖，让圆球茎表面的芽尖直接分化萌发为小苗。

 三、生根与炼苗当苗长至3厘米高、有2～3片叶时，即可将苗小心切离基部，转入壮苗生根培养基中，然后将其置于培养室中培养，培养温度25℃～28℃，光照强度5000～6000勒克斯，光照时间每天12小时，20天左右开始生根，35天可进行炼苗。大花蕙兰瓶苗移栽前先移入遮阳棚内，在自然散射光下（7000～8000勒克斯），光照时间每天8～12小时的环境中放置15～20天，可明显提高瓶苗的质量和栽植成活率。当瓶苗叶色浓绿、叶片坚挺、植株健壮时，即可出瓶移栽。