紫萁组织培养的探讨一

  紫萁(OsmundaJaponicaThunb．)是一种具有明显世代交替的多年生蕨类经济植物，无性世代时间长，切割分蔸进行无性养殖操作难度大，功效低，养殖系数不高．蕨类植物属相对低等的较原始的类群，自然养殖能力弱，是因为孢子萌发、原叶体形成、受精、孢子体形成与生长受到许多环境因素的影响，限制性因素难以在特定时间保证。何义发在田间运用“三段式”育苗培蔸方法，将孢子粉通过有性养殖培育了孢子体幼苗。袁艺、田胜尼、张敏等都以紫萁孢子体作为外植体得到了试管苗。目前还没有愈伤组织诱导成功的报道，但马玉心等对薇菜的的另一个种分株紫萁进行了组织培养研究，成功地组织，并继代、生根、得到试管苗，对紫萁愈伤组织的诱导很有借鉴意义。本文利用孢子粉和孢子囊两种外植体，初步摸索出紫萁原叶体和幼孢子体阶段的无菌培养条件，以期为紫其野生转家种探讨出一套科学的人工栽培技术提供理论基础，为探索适用的快速养殖技术，达到高效、低成本的目的提供技术支持。

    2、材料与方法
    2．1试验材料
    试验材料均于5月份采集孢子囊即将成熟但未散落的孢子叶，将孢子叶抖落于白纸上或剪下装入纸袋中，自然后熟干燥1-2d，收集孢子粉。
    2．2试验方法
    由于通过常规愈伤组织途径很难诱导出愈伤组织，本试验仅利用孢子萌发途径探讨紫萁的组织培养技术。
    采用以下两种方式：
    a．取孢子囊完好的孢子叶小叶流水冲洗，于70%酒精和0.1%升汞溶液中浸泡，无菌水冲洗数次，切成0.5～1cm的小段，接种子附加不同激素的MS和1／2MS培养基上，于25+2℃，光照(40umol/s/m2，12h／d)培养，30d后按下式计算孢子萌发率：
    萌发率=孢子囊变绿并长出原叶体的孢子叶块数／接种的孢子叶块数×100%
    b．将后熟散落的孢子粉于水杯中搅拌后静置数分钟，弃上层液和杂质，除去底部沉淀，再在经高温灭菌的漏斗滤纸中，用70%酒精和0.1%升汞分别过滤，达到时间弃去上层多余的消毒液，无菌水浸洗数次，涂布于1／2MS培养基上。
    以上所有基本培养基均添加2.0%蔗糖+0.6%琼脂粉+200mg／LKH2P04+0.2%活性炭，pH=5.8。每次结果重复三次取平均值。