培养基及其制备

  一、培养基
    自然界的植物千差万别，每一种植物都有自己独特的生理代谢过程和各自的营养需求。因此，没有哪一个培养基能够适用于所有植物。花卉也一样，不同的花卉种类或品种要求不同的营养元素及其适宜浓度。植物组织培养中常用的培养基主要区别在于无机盐的种类与含量。有的植物生长要求无机盐含量较高，而另一些植物则相反。

    1.MS及其类似的培养基
    (1)MS培养基
    在植物组织培养中，MS培养基应用最为广泛，说明MS培养基的无机盐成分对许多植物种均是适宜的。它的无机盐含量较高，微量元素种类较全，浓度也较高。
    将MS培养基略加修改，对一些植物常常能收到较好的效果。下面是几种与MS类似的培养基。
    (2)LS培养基(Linsmainer和SKoog，1965)
    其成分是大量元素、微量元素及铁盐，与MS培养基相同，有机物质中仅保留MS培养基的盐酸硫胺素0.4mg/L及肌醇100mg/L，蔗糖3%。
    (3)BL培养基(Botton和Lawrene，1968)
    成分和MS培养基类似。
    (4)BM培养基(Button，1975)
    成分与MS培养基类似，仅将盐酸硫胺素除去，蔗糖为3%。
    (5)ER培养基(Eriksson，1965)
    成分与MS培养基相似。
    2.硝酸盐含量较高的培养基
    (1)Bg培养基(Camborg等，1968)
    它含有较高的硝酸盐和盐酸硫胺素，较低的氨态氮。
    (2)N6培养基(朱至清等，1975)
    广泛用于植物的花药培养。
    (3)SH培养基(Scken和Hildebrandt,1972)
    它是矿质盐浓度较高的培养基，其中铵与磷酸是从NH4H2P04提供的。
    3.中等无机盐含量的培养基
    (1)H培养基(Bourgin和Nitsch，1967)
    H培养基大量元素(无机盐)是MS培养基的一半，微量元素种类减少而浓度较MS高，维生素种类则较MS多。
    (2)Nitsch(1969)培养基
    与H培养基成分基本相同，仅生物素较H培养基高10倍。
    (3)Miller(1963)培养基和Blaydes(1966)培养基
    二者成分完全相同，与MS培养基比较，无机元素用量减少1/3~1/2，微量元素种类减少，无肌醇。
    4低无机盐培养基因!
    (1)White(WH)培养基
    无机盐的种类及用量均少于MS培养基，约为MS的1/3。
    (2)WS培养基(Wolter和SKoog，1966)
    适于进行生根培养。
    (3)HE培养基(Heller，1953)
    钾盐和硝酸盐是通过不同的化合物来提供的。
    (4)改良Nitsch(1951)培养基
    常用于花药和胚培养。
    (5)HB培养基(Holley和Baker，1963)J
    用于一些花卉植物(如康乃馨)的脱毒培养效果良好。
    此外，为了有利于兰花、杜鹊等花卉的工厂化快速养殖，常常配制更加适合该种植物的培养基。
    二、培养基母液的配制
    培养基中的许多营养元素含量甚微，如果每次配制培养基时，都要称量各种元素，既繁琐又很难称量精确。因此，应先配制成高浓度的母液，然后再吸取一定量的母液配制成要求浓度的培养基。
    在配制母液时，不同的化合物分别称量、分别溶解，难溶物质可以适当加热。完全溶解后，倒入体积为1L的容量瓶中，最后用蒸镏水定容，摇匀。配好的母液应澄清，无沉淀。放入冰箱内，在1~4℃条件下保存。
    激素母液的配制
    ①生长素类化合物可溶于酒精中，可加热助溶,或用1mol/LKOH(或NaOH)助溶。常配成0.5mg/ml质量浓度的溶液，放在冰箱中备用。
    ②细胞分裂素类化合物易溶于稀盐酸(0.5~1.0mol/L)中，溶解后加蒸镏水定容，通常配成0.5mg/ml的质量浓度，贮放于冰箱中备用。
    ③赤霉素可先溶于少量酒精中，再加水定容，通常配成0.5mg/ml质量浓度的母液放于冰箱中备用。
    三、培养基的配制(按1L计)
    1.溶解琼脂
    称量7~15g琼脂条放在洁净的不锈钢锅里，加入500ml蒸镏水，放在电炉上加热，使琼脂充分溶化，并不断搅拌，防止烧焦或沸腾溢出。
    2.营养元素的称量
    按照培养基的要求和母液的浓度计算出大量元素、微量元素、有机成分、铁盐、激素等母液的用量，分别用带刻度的移液管(不能混用)将上述母液依次加入容量为1L的容量瓶中，称量蔗糖20~40g放入琼脂溶液中，如果需要加入其他物质，此时一并加入。再加入溶解好的琼脂，搅拌均匀，最后用蒸镏水将容积补到1L。